男人天堂日韩,中文字幕18页,天天伊人网,成人性生交大片免费视频

elisa測抗原實驗報告

時間:2022-06-01 02:00:09 報告 我要投稿
  • 相關推薦

elisa測抗原實驗報告范文

  一.實驗目的

elisa測抗原實驗報告范文

  酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme-linked immunosorbent assay 簡稱ELISA)是在免疫酶技術(immunoenzymatic techniques)的基礎上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術,ELISA過程包括抗原(抗體)吸附在固相載體上稱為包被,加待測抗體(抗原), 再加相應酶標記抗體(抗原),生成抗原(抗體)--待測抗體(抗原)--酶標記抗體的復合物,再與該酶的底物反應生成有色產(chǎn)物。借助分光光度計的光吸收計算抗體(抗原)的量。待測抗體(抗原)的定量與有色產(chǎn)生成正比。

  二.實驗原理

  用于免疫酶技術的酶有很多,如過氧化物酶,堿性磷酸酯酶,β-D-半乳糖苷酶,葡萄糖氧化酶,碳酸酐酶,乙酰膽堿酯酶,6-磷酸葡萄糖脫氧酶等。常用于ELISA法的酶有辣根過氧化物酶,堿性磷酸酯酶等,其中尤以辣根過氧化物酶為多。由于酶摧化的是氧化還原反應,在呈色后須立刻測定,否則空氣中的氧化作用使顏色加深,無法準確地定量。

  辣根過氧化物酶(HRP)是一種糖蛋白,每個分子含有一個氯化血紅素(protonhemin)區(qū)作輔基。酶的濃度和純度常以輔基的含量表示。氯化血紅素輔基的最大吸收峰是403nm,HRP酶蛋白的最大吸收峰是275nm,所以酶的濃度和純度計算式是(已知HRP的A(1cm 403nm 1%)=25,式中1%指HRP百分濃度為100ml含酶蛋白1g,即10mg/ml,所以,酶濃度以 mg/ml 計算是HRP的A(1cm 403nm mg/ml=2.5)HRP純度(RZ)=A403nm/A275nm純度RZ(Reinheit Zahl)值越大說明酶內所含雜質越少。高純度HRP的RZ值在3.0左右,最高可達3.4。用于ELISA檢測的HRP的RZ值要求在3.0以上。

  ELISA的基本原理有三條:

 。1)抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫學活性;

  (2)抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結合物,而此種酶結合物仍能保持其免疫學和酶學活性;

 。3)酶結合物與相應抗原或抗體結合后,可根據(jù)加入底物的顏色反應來判定是否有免疫反應的存在,而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的,因此,可以按底物顯色的程度顯示試驗結果。

  ELISA法是免疫診斷中的一項新技術,現(xiàn)已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,根據(jù)已經(jīng)使用的結果,認為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查,而且由于一天之內可以檢查幾百甚至上千份標本,因此,也適合于血清流行病學調查。本法不僅可以用來測定抗體,而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原,所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學各領域的應用范圍日益擴大,可概括四個方面:

  1、免疫酶染色各種細胞內成份的定位。

  2、研究抗酶抗體的合成。

  3、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應。

  4、定量檢測體液中抗原或抗體成份。

  基本方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:

  1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。

  2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。

  3. 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。

  4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。

  5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

  6. 結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測O·D值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔O·D值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

  基本方法二 用于檢測未知抗體的間接法:

  用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml, 每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。  ↓

  加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)  ↓

  于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,最后一遍用DDW洗滌。  ↓

  其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。

 。ǘ 酶與底物

  酶結合物是酶與抗體或抗原, 半抗原在交聯(lián)劑作用下聯(lián)結的產(chǎn)物。是ELISA成敗的關鍵試劑,它不僅具有抗體抗原特異的免疫反應,還具有酶促反應,顯示出生物放大作用,但不同的酶選用不同的底物。

  免疫技術常用的酶及其底物

  *  終止劑為2mol/L H2SO4

  ** 終止劑為2 mol/L檸檬酸, 不同的底物有不同的終止劑。

  可催化下列反應: HRP+H2O2→復合物 復合物+AH2→過氧化物酶+H2O+A AH2 ——為無色底物, 供氫體; A—— 為有色產(chǎn)物。

 。ㄈ ELISA常用的四種方法

  1.直接法測定抗原  將抗原吸附在載體表面;

  加酶標抗體,形成抗原—抗體復合物; 加底物。底物的降解量=抗原量。

  2.間接法測定抗體

  將抗原吸附于固相載體表面; 加抗體, 形成抗原-抗體復合物; 加酶標抗體;

  加底物。 測定底物的降解量=抗體量。

  3.雙抗體夾心法測定抗原

  將抗原免疫第一種動物獲得的抗體吸附于固相表面;加抗原,形成抗原-抗體復合物;

  加抗原免疫第二種動物獲得的抗體,形成抗體抗原抗體復合物;加酶標抗抗體(第二種動物抗體的抗體); 加底物。底物的降解量=抗原量。

  4. 競爭法測定抗原

  將抗體吸附在固相載體表面;

  (1) 加入酶標抗原;

 。2),(3)加入酶標抗原和待測抗原;

  加底物。對照孔與樣品孔底物降解量的差=未知抗原量。

【elisa測抗原實驗報告】相關文章:

測平均速度的實驗報告范文-實驗報告01-27

重鉻酸鉀法測cod實驗報告范文-實驗報告08-16

測量血壓實驗報告-實驗報告01-27

初中物理實驗報告-實驗報告08-17

示波器的使用實驗報告-實驗報告01-27

大學化學實驗報告-實驗報告08-16

材料力學實驗報告-實驗報告01-26

有機化學實驗報告-實驗報告08-16

鉗工實訓鉗工實驗報告-實驗報告01-26

紙杯旋轉燈實驗報告范文-實驗報告01-26