解剖實驗報告

　　蛙類坐骨神經(jīng)–腓腸肌標本制備、不同頻率刺激對肌肉收縮的影響

　　一．目的要求

　　1. 掌握蛙類雙毀髓的試驗方法；

　　2. 掌握坐骨神經(jīng)—腓腸肌標本標本的制作方法；

　　3. 觀察不同刺激頻率對骨骼肌收縮形式的影響。

　　二．基本原理

　　蛙類動物的某些基本活動，如神經(jīng)的生物電活動、肌肉收縮等與哺乳動物相似。其離體組時所需的生活條件比較簡單，易于控制和掌握，而且動物來源豐富，因此在生理實驗中常用蛙類的坐骨神經(jīng)—腓腸肌標本和坐骨神經(jīng)標本來觀察組織的興奮性、刺激與反應的規(guī)律以及骨骼肌收縮的特點等。肌肉受到一次閾上刺激而產(chǎn)生的一次收縮為單收縮，其過程可分為三個時相，即潛伏期、縮短期和舒張期。肌肉受到連續(xù)的閾上刺激時，如果刺激間隔小于單收縮的過程，相鄰兩單收縮的時相會出現(xiàn)融合，表現(xiàn)為強直收縮現(xiàn)象。如果表現(xiàn)為每次收縮的開始發(fā)生在上次收縮的縮短期，稱完全強直收縮，如果表現(xiàn)為每次收縮的開始發(fā)生在上次收縮的舒張期，稱不完全強直收縮。使用生物信號采集處理系統(tǒng)，可以觀察到腓腸肌收縮的情況。

　　三．實驗材料

　　實驗動物：健康青蛙一只；

　　實驗器材和藥品：蛙類手術(shù)器械一套（粗剪刀一把，組織剪一把，眼科剪一把，鑷子一把，探針一根、玻璃分針2把，蛙釘4個、培養(yǎng)皿一個，蛙板一個、滴管一個、棉線若干），張力換能器，肌槽，刺激電極，鐵架臺，生物信號采集處理系統(tǒng)，微機，任氏劑。

　　四．實驗步驟

　　搗毀蟾蜍腦脊髓：取蟾蜍一只，用自來水沖洗干凈。左手握蛙，用食指下壓頭部前端，拇指按壓背部，使頭前俯。中指與無名指夾其前肢，無名指與小指夾其后肢，使整個軀干做最大屈曲。把探針自枕骨大孔處垂直刺入，到達椎管，即將探針改變方向刺入顱腔，向各側(cè)不斷攪動，徹底搗毀腦組織；再將探針原路退出，刺向尾側(cè)，捻動探針使其逐漸刺入整個椎管內(nèi)，完全徹底搗毀脊髓。脊髓破壞完全的標志是：下頜呼吸運動消失，反射消失，四肢松軟。

　　剪除軀干上部和內(nèi)臟，去皮，制備下肢標本： 用粗剪刀在骶髂關(guān)節(jié)前1厘米處剪斷脊柱，握住蟾蜍下肢，沿軀干兩側(cè)（避開坐骨神經(jīng)）剪開腹壁。此時軀干上部及內(nèi)臟即全部下垂。剪除全部軀干及內(nèi)臟組織。剪去肛周皮膚；用圓頭鑷子夾住脊柱，注意不要碰到坐骨神經(jīng)，捏住皮膚邊緣，逐步向下牽拉剝離皮膚。將全部皮膚剝除后，把標本置于盛有任氏液的培養(yǎng)皿中。 2.1.1.3洗凈雙手和用過的全部手術(shù)器械。

　　分離兩下肢： 避開坐骨神經(jīng)，用粗剪刀從背側(cè)剪去骶骨，然后沿中線將脊柱剪成左右兩半，再從恥骨聯(lián)合中央剪開，將已分離的標本浸入盛有任氏液的培養(yǎng)皿中。 2.1.1.5 取出一下肢，用蛙釘固定于蛙板上，固定時要注意，坐骨神經(jīng)和腓腸肌朝上。先用玻璃分針沿脊柱側(cè)游離坐骨神經(jīng)腹腔部，然后循股二頭肌和半膜肌之間的坐骨神經(jīng)溝，縱向分離暴露坐骨神經(jīng)之大腿部分直至腘窩，在分離過程中，把神經(jīng)周圍的結(jié)締組織去除干凈，并把神經(jīng)的細小分支剪斷，但要注意不要用金屬器械碰觸神經(jīng)，也不要對神經(jīng)過度牽拉。實驗期間應不斷滴加任氏液使神經(jīng)保持濕潤。

　　用玻璃分針游離腓腸肌，并在下面穿線，在跟腱處打結(jié)。在結(jié)扎線的下方剪斷跟腱，在膝關(guān)節(jié)處把除腓腸肌外的小腿其他部分剪除。注意保持完整的腓腸肌。 2.1.1.7用棉線在靠近脊柱的位置結(jié)扎坐骨神經(jīng)，并在結(jié)扎線的上方剪斷神經(jīng)，用眼科剪剪斷坐骨神經(jīng)的全部支。從腘窩處開始剪掉大腿所有的肉，盡量把股骨刮干凈，在膝關(guān)節(jié)上至少1cm處剪去上段股骨。將標本浸入任氏劑的培養(yǎng)皿中。

　　實驗裝置與儀器連接：1.將標本股骨殘端固定在肌槽上的小孔內(nèi)；2.將結(jié)扎腓腸肌肌腱的.棉線與張力換能器連接，調(diào)節(jié)棉線的松緊，要與桌面垂直；3.將神經(jīng)置于肌槽的刺激電極上，用任氏劑保持標本濕潤；4.刺激電極插入微機上的刺激輸入孔；5.張力換能器與微機相應通道相連。

　　打開電腦，進入生物信號采集處理系統(tǒng)，在菜單欄選擇“實驗項目”--------》“神經(jīng)肌肉”-------》“刺激強度與反應的關(guān)系實驗模塊”點擊開始，調(diào)節(jié)刺激參數(shù)，使頻率自動逐漸遞增，串間隔為2.連續(xù)記錄不同頻率時的肌肉收縮曲線。

　　五．結(jié)果與分析

　　不同頻率刺激對肌肉收縮的影響：串間隔為2,頻率增量為1時的張力變化（如圖）可見單收縮、不完全強直收縮、完全強直收縮。

　　分析：刺激強度到達閾刺激時腓腸肌開始收縮，在最大刺激收縮力前隨刺激強度增大而增大，到達最大刺激強度后，收縮力不發(fā)生明顯改變；在最大刺激強度條件下，某較小頻率使腓腸肌發(fā)生單收縮(如圖中第一次刺激)，頻率增大到，單收縮變?yōu)椴煌耆珡娭笔湛s（如圖中第2-6次刺激），頻率繼續(xù)增大，不完全強直收縮變?yōu)橥耆珡娭剖湛s（如圖中第7、8次刺激）。不同的腓腸肌其閾刺激，最大刺激均存在差異；其單收縮，不完全強直收縮和完全強直收縮所要頻率也不盡相同。

　　六．實驗總結(jié)

　　本次試驗嚴格按照操作步驟進行，所得實驗結(jié)果較為理想，很容易觀察到腓腸肌的單收縮、不完全強直收縮、完全強直收縮現(xiàn)象。在實驗的過程中，制備坐骨神經(jīng)-腓腸肌標本是最繁瑣的步驟，也是實驗成功的關(guān)鍵所在，期間，我們進行的比較緩慢，生怕弄錯了哪一步，一步步想原理、回憶老師是怎么說的，所幸的是我們最終成功了，得到了較好的結(jié)果，在這次的不斷嘗試和思考中，很好地鍛煉了我們的動手能力和思維能力。

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