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天胡荽藥材中槲皮素的實驗鑒定論文

時間:2021-06-14 10:15:51 論文 我要投稿

天胡荽藥材中槲皮素的實驗鑒定論文

  1 儀器與試藥

天胡荽藥材中槲皮素的實驗鑒定論文

  Agilent1100型高效液相色譜儀(自動進(jìn)樣品),二極管陣列檢測器(DAD); AB104-N型電子天平(德國Mettler-Toledo Group公司);薄層色譜硅膠G(青島海洋化工有限公司);乙腈為色譜純,其余試劑均為分析純,水為重蒸鎦水;槲皮素對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:100081-200406);10批天胡荽藥材樣品采自貴州各地,經(jīng)筆者鑒定為傘形科植物天胡荽Hydrocotyle sibthorpioides Lam.和破銅錢Hydrocotyle sibthorpioides Lam.Var.batrachium(Hance)Hand.-Mazz.ex Shan的干燥全草。

  2 方法與結(jié)果

  2.1 定性鑒別

  2.1.1 供試品溶液的制備

  取干燥至恒重的天胡荽藥材粉末約3 g,精密稱重,置圓底燒瓶中,精密加入甲醇-25%鹽酸溶液(4∶1)提取液75 ml,置水浴中加熱回流1 h,濾過,將濾液水浴蒸干,用適量蒸餾水溶解,移至分液漏斗中,加醋酸乙酯30 ml(10,10,10 ml)萃取,合并醋酸乙酯萃取液,減壓回收醋酸乙酯至干,殘渣加甲醇3ml使溶解,取上清液作為供試品溶液。

  2.1.2 對照品溶液的制備

  精密稱取槲皮素對照品13.6 mg,置50 ml的量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,作為對照品溶液。

  2.1.3 薄層色譜法[4]

  照薄層色譜法試驗,吸取供試品溶液及槲皮素對照品溶液各10 μl分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的`硅膠G薄層板上,以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)為展開劑,置鹽酸蒸氣飽和的展開缸內(nèi),展開,取出,晾干。供試品色譜中,在與對照品相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點。

  2.2 HPLC測定

  2.2.1 色譜條件

  色譜柱為Dikma公司Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動相為乙腈- 0.1%磷酸(45∶55);流速0.8 ml/min。檢測波長370 nm,柱溫25℃。進(jìn)樣量10 μl。理論塔板數(shù)按槲皮素計算,應(yīng)不低于5 000。在此色譜條件下,槲皮素對照品、天胡荽藥材的HPLC圖譜見圖1~2。

  2.2.2 對照品溶液的制備

  精密吸取“2.1.2”項下的槲皮素對照品溶液1ml,置25ml的容量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,作為對照品溶液。取干燥至恒重的天胡荽藥材粉末約0.5 g,精密稱重,置50 ml具塞錐形瓶中,精密加入甲醇-25%鹽酸溶液(4∶1)提取液25 ml,稱定重量,置水浴中加熱回流1 h,放冷,稱重,用提取液補足減失的重量,搖勻,濾過,精密吸取續(xù)濾液5 ml至25 ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45 μm) 濾過,取續(xù)濾液,即得供試品溶液。

  2.2.3 線性關(guān)系考察

  精密吸取槲皮素對照品溶液1.0,2.0,4.0,6.0,8.0,10.0 μl,進(jìn)樣,測定峰面積,以色譜峰面積為縱坐標(biāo), 槲皮素進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸分析,線性回歸方程: Y=6 442.9X-1.491 5,r=0.999 8,結(jié)果表明槲皮素在0.010 88~0.108 8 μg進(jìn)樣量與峰面積的線性關(guān)系良好。對照品溶液10 μl,連續(xù)進(jìn)樣5次,記錄色譜圖,結(jié)果槲皮素峰面積的RSD為0.19%。取同一供試品溶液,分別在0,2,4,6,8,10 h進(jìn)樣,記錄色譜圖,結(jié)果槲皮素峰面積的RSD為1.15%。表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。取同批藥材5份,精密稱定,按“2.2.3”項下供試品溶液制備方法制備并測定,槲皮素平均含量為0.11%,RSD為0.96%。

  3 結(jié)果

  天胡荽為傘形科植物天胡荽或破銅錢的干燥全草,具有清熱解毒、利濕之功效,用于黃疸型肝炎、膽結(jié)石、目翳[1]治療。天胡荽含槲皮素(quercetin)、槲皮素-3-半乳糖苷(quercetin-3-galactoside)等黃酮類化合物[2],其中槲皮素具有抗炎、抗氧化、抗癌和抗突變等多種功能[3],是天胡荽藥材的有效成分之一。通過實驗發(fā)現(xiàn),在槽內(nèi)先加入展開劑,再在展開缸內(nèi)用小燒杯盛上鹽酸,然后進(jìn)行薄層板預(yù)飽和30min,再展開,其色譜斑點圓而集中,分離度較好。天胡荽藥材除了含有槲皮素外,還有多種黃酮苷,本文以鹽酸和硫酸作為水解酸進(jìn)行了比較,還對水解酸的濃度、溶劑和提取時間進(jìn)行了考察。結(jié)果本文所用的條件較好。

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